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细胞的复苏与冻存
点击次数:51 发布时间:2019-05-20


细胞的复苏与冻存
细胞复苏:指将冻存的细胞解冻之后重新培养,细胞恢复生长的过程。

复苏过程如下图所示:

 

常见问题解答:

Q:为什么细胞复苏后,很多难以贴壁?


A:忽略培养基的问题,主要考虑细胞冻存时状态差或者复苏时动作太慢导致细胞死亡。切记最重要的融化速度要快,可不时摇动冷冻管,使之尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。

 

Q:为什么细胞贴壁了,却长不起来?


A:此时需要考虑的是细胞密度问题,一些细胞倾向于维持一定的密度,若复苏的细胞生长缓慢,可将细胞转移到较小的培养瓶/皿中培养。

 

 

细胞冻存:将细胞放在低温环境(-70℃~-196℃),细胞内的代谢降低,可最大限度的保存细胞活力,以便长期储存。

 

 

 

常见问题解答:
Q:目前细胞冻存液多采用的什么配方?


A:目前细胞冻存液的配方有很多种,如培养基:血清:DMSO=7:2:1或8:1:1或5:4:1,或直接用血清:DMSO=9:1。 这里小秋推荐使用HAKATA无血清细胞冻存液,无需程序降温,细胞存活率和活力高达90%-98%,适用于干细胞冻存及无血清培养细胞。

 

Q:若没有细胞冻存盒,我们该怎么办?


A:可先将冻存管放入4℃冰箱中10min,再移至-20℃冰箱30min,-80℃冰箱2h或过夜,最后放入液氮罐内。为了节约时间,还可直接在冻存盒外包裹一团棉花,用棉花代替冻存盒缓慢降温的特点,将细胞转移至-80℃冰箱过夜,再转移至液氮保存。

 

Q:细胞冻存时对细胞量有要求吗?


A:细胞复苏时会有一定的细胞死亡,因此细胞的浓度应足够高,起始浓度106—107个/ml/管;

 

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