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消灭细胞培养中的污染
点击次数:97 发布时间:2019-06-18

当清晨的阳光满照大地时,在细胞培养室的角落,倒置显微镜旁,总会聚集着几个孩纸,时不时的各种感慨。啊……细胞又长满了!咦……细胞咋飘了好多?唉……这个细胞状态好差,能不能长起来?完了完了,细胞污染了……

 

各种细胞,总会有各样问题让人猝不及防。

 

虽说细胞培养是基础性的技术,但并不是每个人都能把每种细胞养的很好呢!

 

今天小编就来说说细胞培养室里细胞污染的事儿。

 

常见的细胞污染除了来自其它细胞系的交叉污染外,包括支原体、细菌、真菌污染。这些微生物污染对细胞产生的影响很大呢!例如,它们会与宿主细胞竞争营养;分泌酸性或碱性的副产物,使宿主细胞停止生长;产生对细胞直接有毒的H2O2等等。

 

有同学说,我使用了无菌的试剂和耗材,也遵循了无菌操作的要求,然而……还是莫名污染了。隔壁的同学还没有我做的仔细呢!

 

那么,这种情形下,细胞到底为什么会污染呢?细胞污染要怎么办呢?

 

小编觉得此同学和彼同学,最大的差异恐怕是操作环境了。给大家提个醒,细胞培养室的环境控制尤为重要啦。

 

有这样一篇文献[1],作者对比了正常细胞培养室和污染培养室,在可能污染的位置放了血培养皿,根据微生物的生长状况,研究细胞污染的原因。以下是代表性的培养结果。

 

 

 

 

 

污染物是毋庸置疑的源头,培养室的空气、培养箱内循环的空气、培养箱的层架以及显微镜的载物台和物镜都可能是污染源。

 

其实,特别容易成为污染源的地方有这么几个:

 

1)空调(估计是细胞培养室没有做层流,也不经常清洗)。

2)生物安全柜的空气过滤系统。

3)生物安全柜的进风口(如下图黄线圈出的位置,操作不慎的话,很容易把培养基或者血清之类的东西滴进这个风口,里面长个霉什么的都是正常的,因为你不会及时拆开清理)。

 

 

 

 

4)显微镜(一般也不会有人用84擦显微镜吧)

 

5)培养箱的水盘和复苏细胞用的水浴锅(基本上是温床,但是可以在里面加入硫酸铜,并且周期性更换来避免长菌,但问题是硫酸铜会损伤不锈钢)。

6)离心机(也是重灾区)。

7)液氮罐(这个估计大家都不会注意的,但好在液氮罐污染可能性比较低)。

 

如果出现细胞污染的情况,劝你直接加入84,灭活以后丢弃。万一不幸,真菌肆虐,细胞培养室还要用甲醛熏蒸。

 

但是,你的细胞特别珍贵,污染了,怎么办?那就要用抗生素了!

 

1)、最常用:青霉素、链霉素联合抑制细菌,即所谓的“双抗”,主要针对革兰氏阳性菌、阴性菌;对于细菌的感染也可用庆大或卡那霉素;


2)、如果真菌污染严重,可用两性霉素/制霉菌素控制;


3)、若为支原体污染,可用庆大霉素/四环素/红霉素;

 

注意,抑制真菌的抗生素,对细胞都有比较大的伤害。使用前,一般都建议先做预实验,估计对细胞本身的影响。

本次的细胞培养就写到这里。关于细胞培养更多的故事,请后续关注~

 

今天,你的细胞还好么?

 

 

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